水产百科

一、常用溶液配制

2023-02-18

1. 10%中性福尔马林固定液配制 福尔马林 100 mL Na2HPO4·12H2O 39.50g NaH2PO4·2H2O 10.95 g 蒸馏水定容至1 L。 2. 戴维森氏AFA (Davidson’ s AFA)固定液 95%乙醇 330 mL 37%福尔马林 220 mL 冰醋酸 115 mL 海水 (用于海洋甲壳类)或自来水 335 mL 混匀,室温密封保存。 3. 2.5%戊二醛固定液 0.2 mol/L磷酸缓冲液 50 mL 25%戊二醛溶液 10 mL 加双蒸水至100 mL。 4. 0.5麦氏比浊管配制方法 0.048 mol/L BaCl2 (1.17% W/V BaCL2·2H2O) 0.5 mL 0.36 mol/L H2SO4 (1%,V/V) 99.5 mL 混合液体,置螺口试管中,放室温暗处保存。用前混匀,有效期为6个月。 5. 显微镜镜头清洁剂 将乙醚和乙醇按7 : 3混合,装入滴瓶备用。用于擦拭显微镜镜头上油迹和污垢等 (注意瓶口必须塞紧,以免挥发)。 6. PBS缓冲液 Na2HPO4 0.56 g KH2PO4 0.14 g NaCl 8.5 g 蒸馏水定容至1 L,pH7.6。 7. 0.2 mol/L磷酸缓冲液 A液: Na2HPO4·2H2O 35.61 g,加双蒸水溶解至1 000 mL。 B液: NaH2PO4·H20 27.60 g,加双蒸水溶解至1 000 mL。 磷酸缓冲液的配制:

表Ⅱ -1 磷酸缓冲液的配制

pH(25℃) 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8
A液(mL) 24.5 30.5 36.0 40.5 43.5 45.75
B液(mL) 25.5 19.5 14.0 9.5 6.5 4.25

8. TAE电泳缓冲液(50×浓缩液)(pH 8.5) (1)称量下列试剂,置于1L烧杯中。 Tris 242 g Na2EDTA·2H2O 37.2 g (2) 向烧杯中加入约800 mL的去离子水,充分搅拌溶解。 (3)加入57.1 mL的醋酸,充分搅拌。 (4)加去离子水将溶液定容至1 L后,室温保存。 9. 10×TBE buffer (pH 8.3) (1)称量下列试剂,置于1L烧杯中。 Tris 108 g Na2EDTA·2H2O 7.44 g 硼酸 55 g (2) 向烧杯中加入约800 mL的去离子水,充分搅拌溶解。 (3)加去离子水将溶液定容至1 L后,室温保存。 10. 1 mol/L Tris-HCl (1)称量121.1 g Tris置于1 L烧杯中。 (2)加入约800 mL的去离子水,充分搅拌溶解。 (3)按下面所列体积加入浓盐酸调节所需要的pH。 pH 浓HCl 7.4 约70 mL 7.6 约60 mL 8.0 约42 mL (4)将溶液定容至1 L。 (5) 高温高压灭菌后,室温保存。 注意: 应使溶液冷却至室温后再调定pH,因为Tris溶液的pH随温度的变化差很大,温度每升高1℃,溶液的pH大约降低0.03个单位。 11. 苯酚/氯仿/异戊醇 将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇 (24 : 1)均匀混合后,移入棕色玻璃瓶中4℃保存。 12. 0.5 mol/L EDTA (1)称取186.1 g Na2EDTA·2H2O,置于1 L烧杯中。 (2)加入约800 mL的去离子水,充分搅拌。 (3)用NaOH调节pH至8.0 (约20 g NaOH)。 注意: pH至8.0时,EDTA才能完全溶解。 (4)加去离子水将溶液定容至1 L。 (5)适量分成小份后,高温高压灭菌后室温保存。 13. 0.5 mol/L氢氧化钠溶液 (1)准确称取NaOH 40 g。 (2)用去离子水溶解并定容至2 L。 14. 2.5 mol/L盐酸溶液 (1)在500 mL水中加入浓HCl (37% HCl) 246.35 mL。 (2)加水700 mL溶解,冷却后定容至1 000 mL。 (3)置于聚丙烯塑料瓶中,旋紧瓶盖,室温保存。 15. 抽提液Ⅰ (1)量取下列溶液,置于1 L烧杯中。 1 mol/L Tris-HCl (pH 8.0) 25 mL 0.5 mol/L EDTA (pH 8.0) 20 mL 20% Glucose (1.11 mol/L) 45 mL 双蒸水 910 mL (2)高温高压灭菌后,4℃保存。 (3)使用前每50 mL的Soliution I中加入2 mL的RNase A (20 mg/mL)。 16. 抽提液Ⅱ (1)量取下列溶液置于500mL烧杯中。 10% SDS 50 mL 2 mol/L NaOH 50 mL (2)加灭菌水定容至500 mL,充分混匀。 (3)室温保存。此溶液保存时间最好不要超过1个月。 注意: SDS易产生气泡,不要剧烈搅拌。 17. 抽提液Ⅲ (1)量取下列溶液置于500 mL烧杯中。 KOAc 147 g CH3COOH 57.5 mL (2)加入300 mL去离子水后搅拌溶解。 (3)加去离子水将溶液定容至500 mL。 (4)高温高压灭菌后,4℃保存。 1 8. 20×SSC缓冲液 (1)准确称取175.2 g NaCl。 (2)准确称取88.2 g Na3C6H5O7·2H2O。 (3)溶解于800 mL去离子水中。 (4)加入数滴10 mol/LNaOH溶液调节pH 7.0。 (5)加去离子水定容至1 L。 注意: 按实验需要可分装后高压灭菌。 10×SSC、5×SSC、1×SSC可由20×SSC做相应稀释得到。 19. CTAB溶液 按2% CTAB溶液配制,氯化钠1.4 mol/L,EDTA 20 mmol/L,Tris-HCl20 mmol/L,pH 7.5配制。用前加巯基乙醇至终浓度为0.25%。 20. 75%乙醇 95%乙醇 750 mL 加水定容至950 mL,混匀,室温保存。 21. 10 mol/L乙酸铵 乙酸铵 77 g 水 30 mL 加水定容至100 mL,经0.45 μm滤膜过滤除菌,4℃贮存。 22. 20 mol/L蛋白酶K 蛋白酶K 20 mg 水 1 mL 溶解后分装于无菌离心管中,-20℃贮存。 23. 革兰氏染色染剂 (1)结晶紫染色液。 甲液: 结晶紫2.0g,95%乙醇20mL。 乙液: 草酸铵0.8 g,蒸馏水80 mL。 将甲、乙两液相混后加入密闭的棕色瓶中,静置48 h后过滤使用。 (2)碘液。 碘 1.0 g 碘化钾 2.0 g 蒸馏水 300 mL 先用少量 (3~5 mL)蒸馏水溶解碘化钾,再投入碘片,待碘全溶解后,加水定容至300 mL。 (3)脱色液 (丙酮乙醇溶液)。 乙醇 (95%) 70 mL 丙酮 30 mL (4)复染液。 0.5%番红 (Safranine O) 水溶液 番红2.5%乙醇溶液 20 mL 蒸馏水 80 mL 24. 氧化酶试剂 1%盐酸二甲基对苯二胺水溶液,储存于茶色瓶中,4℃冰箱中保存。 25. 接触酶试剂 3%~10%过氧化氢。 26. EB (Ethidium Bromide,核酸染色剂) 用水配制成10 mg/mL的浓缩液,用时每10 mL电泳液或琼脂中加1 μL。注意:EB (溴化乙锭)是一种致癌物质,使用含有EB溶液时,请戴好手套。 27. 琼脂糖凝胶 (1)配制适量的电泳及制胶用的缓冲液 (通常是0.5×TBE或1×TAE)。 (2)根据制胶量及凝胶浓度,准确称量琼脂糖粉,加入锥形瓶中。 (3)加入一定量的电泳缓冲液 (总液体量不宜超过锥形瓶的50%容量),注意: 用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须统一。 (4)在锥形瓶的瓶口上盖上保鲜膜,并在膜上扎些小孔,然后在微波炉或者加热器上加热溶解琼脂糖,当溶液沸腾后,请戴上防热手套,小心摇动锥形瓶,使琼脂糖充分均匀溶解。须注意,每次加热时间不宜过长,当溶液起泡沸腾后停止加热,否则会过热引起暴沸,造成琼脂糖凝胶浓度不准。溶解琼脂糖时,必须保证琼脂糖充分完全溶解,否则,会造成电泳条带模糊不清。 (5)使溶液冷却至60℃左右,如需要可在其中加入溴化乙锭溶液 (终浓度0.5 μg/mL),并充分混匀。 (6)将琼脂糖溶液倒入制胶模中,然后在适当的位置插上梳子。凝胶厚度一般3~5 mm。 (7)在室温下使凝胶凝固 (0.5~1 h),然后放置于电泳槽中进行电泳。 注意: 凝胶不立即使用时,请用保鲜膜将凝胶包好后在4℃下保存,一般可保存2~5 d。 28. 0.05%孔雀石绿染液 孔雀石绿 (水溶性) 0.05 g 加水溶解定容至100 mL,室温贮存。