一、单体牡蛎(cultchless oyster)的培育
牡蛎具有群聚的生活习性，常多个牡蛎固着在一起，由于生长空间的限制，壳形极不 规则，大大地影响了美观。群聚还造成牡蛎在食物上的竞争，影响其生长速度。无固着基 牡蛎由于其游离性而不受生长空间的限制，因而壳形规则美观，大小均匀，易于放养和收 获。网笼养殖和海底播养增加了养殖空间和饵料利用率，提高了单位养殖水体的产量。 网笼养殖减小了蟹类、肉食性螺类等较大个体敌害的危害。
无固着基牡蛎的形成是在牡蛎幼虫出现眼点即具有变态能力时，对其进行一系列的 处理，使之成为单个的游离的牡蛎。一般采用下列三种方法：
(1)肾上腺素(EPI)和去甲肾上腺素(NE)处理法。EPI和NE能诱导牡蛎眼点幼虫 产生不固着变态行为，其最适浓度为10-4mol/L，诱导不固着变态率分别达59.9%和 58.0%。药品处理对稚贝的生长无明显副作用。另外，二羟基苯氨基丙酸(L-DOPA)和 儿茶酚胺也有诱导幼虫不固着变态的作用。
(2)颗粒固着基采苗法。使用微小颗粒作固着基，让幼虫固着变态。变态后的稚贝生 长速度较快，微小的颗粒固着基对于稚贝来说，就显得微不足道，起不了固着基的作用，故 蛎苗还是单个的、游离的。用作颗粒固着基的有石英砂和贝壳粉。利用底质分样筛筛选 出0.35～0.50 mm大小的颗粒，尤其以0.35 mm左右的颗粒产生的单体率最高。这个 粒度大小与褶牡蛎眼点幼虫的自身壳长相当，是褶牡蛎幼虫固着基的最小规格。颗粒小 于0.25 mm时无幼虫固着，大于0.50 mm时，幼虫固着苗量较多，而单体率降低。
(3)先固着后脱基法。牡蛎幼虫出现眼点后，向池中投放各种固着基让幼虫固着，待 其长到一定大小时，再脱基而成无固着基牡蛎。若选用那些质硬、面粗的贝壳、瓦片等做 固着基，采苗效果虽好，但脱基困难，蛎苗易被剥碎。一般以质软的塑料板(厚2～3 mm) 或盘作为采苗器为佳，尤以灰色塑料板效果最好。废旧的聚丙烯打包带经彻底处理后，也 是较理想的采苗器。蛎苗长至1～2 cm时，弯曲塑料板或聚丙烯打包带，小蛎苗便顺利地 脱落，不受任何机械损伤。
二、三倍体牡蛎的培育
牡蛎的多倍体育种主要集中在三倍体和四倍体。
三倍体牡蛎是指体细胞中含有3个染色体组的牡蛎个体。三倍体牡蛎有育性差、生 长快、风味好等优点，从而具有较高的经济价值;且三倍体牡蛎由于具有三套染色体组，减 数分裂过程中染色体的联合不平衡导致三倍体的高度不育性，能形成繁殖隔离，不会对养 殖环境造成品种污染;目前，三倍体牡蛎的产生有以下三种途径：①生物方法：利用四倍体 与二倍体杂交产生100%的三倍体。②物理方法：利用水静压或温度休克抑制一个极体 的排放。③化学方法：利用细胞松弛素B(CB)、6-二甲基氨基嘌呤(6-DMAP)或咖啡因处 理受精卵，抑制第二次成熟分裂。
利用生物杂交方法，通过四倍体与二倍体的杂交获得三倍体，操作简单，易于推广，没 有诱导剂的毒副作用，更主要的是三倍体率可以达到100%。这种方法适合于规模化生 产，但这种方法的关键是四倍体的获得。
这里简单介绍利用6-DMAP诱导牡蛎产生三倍体的方法。
1.采卵
采用解剖法获取精、卵。牡蛎解剖后，首先镜检分辨雌、雄并检查精、卵的质量，选取 性腺发育好的个体待用，发育差的剔除。解剖每个牡蛎之前需消毒工具，雌、雄严格分开 放置。卵子剥离后，先用孔径60 μm的筛绢滤去较大的组织碎片，再用孔径20 μm的筛 绢过滤去组织液及破碎的卵子。精液以孔径20 μm的筛绢过滤。
2.受精
采用人工方法受精。向卵液中加入适量精液，搅动均匀，以每个卵子周围有2～3个 精子为宜。若精子过多，可在加入精子5～10 min后，用孔径20 μm的筛绢过滤洗卵。
3.处理
镜检观察，当发现40%～50%的受精卵放出第一极体后，立即向卵液中加入6- DMAP溶液，浓度为50～70 mg/L。受精卵在6-DMAP溶液中处理10～20 min后，用孔 径20 μm的筛绢滤去药液并冲洗受精卵，然后将受精卵移入孵化池中孵化。
4.孵化
孵化密度以50～80个/毫升为宜。孵化期间要观察胚胎发育状况。当胚胎发育至4 ～8细胞期，取样固定，进行胚胎期的三倍体率检查。
5.幼虫及稚贝培育
当受精卵发育至D形幼虫时，进行选幼，并进入幼虫培育阶段。三倍体牡蛎的幼虫 及稚贝培育与二倍体相同，如投饵、换水、清底、倒池、加温、观测生长发育和检测水质等。 由于牡蛎幼虫发育速度差别很大，因此在培育中要进行分选。在壳顶幼虫期，利用孔径 300 μm和200 μm筛绢将幼虫分选成大、中、小三批，并分别培养，幼虫达300 μm以上 者，准备投放采苗器材。
6.倍性检查
目前，牡蛎的倍性主要通过染色体计数和流式细胞计测DNA的相对含量来鉴定。
(1)染色体计数：利用染色体制片技术进行染色体计数可以直接准确地鉴定倍性，在 胚胎期、幼虫期、稚贝期和成贝期均可进行。牡蛎单套染色体数目为10，二倍体体细胞内 染色体数目为2n=20，三倍体则为3n=30。染色体制片通常有滴片法和压片法两种。
滴片法适用于胚胎、幼虫、幼贝或成贝等各个时期，样品依次经0.005%～0.01%秋 水仙素处理(15～40 min)、0.075 mol/L KCl低渗(10～30 min)、Carnoy’s固定液固定 (甲醇：冰醋酸=3：1)、50%醋酸解离1～5 min、滴片、干燥、染色等步骤制成染色体片 子后，直接镜检观察染色体。
压片法适用于早期胚胎的染色体观察，一般采用乙酸地衣红、铁苏木精染色。
(2)流式细胞术：流式细胞术检测倍性的基本原理是用DNA-RNA特异性荧光染料 对细胞进行染色，在流式细胞计上用激光或紫外光激发结合在细胞核的荧光染料，依次检 测每个细胞的荧光强度，然后与已知二倍体或单倍体细胞的荧光强度对比，判断被检查细 胞群体的倍性组成。对成体贝类来说，取样自鳃组织、血淋巴、外套膜组织、出水管以及足 部组织的活组织样品均可用于流式细胞术分析。样品处理过程大体包括取样、加入DAPI/DMSO溶液进行荧光染色、振荡或用注射器反复抽吸、筛网过滤，制成细胞悬液后，即 可上机分析。
此外，利用显微荧光光度计、核径测量、极体计数、微核计数、核仁计数及电泳等方法 也可以进行倍性检查。
7.三倍体牡蛎的生物学性状
(1)育性差。从外观上看，三倍体太平洋牡蛎的性腺发育程度较差，雄性的性腺发育 程度仅为二倍体的一半，而雌性的卵巢发育程度仅为正常二倍体的1/4。尽管三倍体的 性腺发育程度较差，但并非绝对不育，有些三倍体的性腺也能产生成熟的精子和卵子，但 是其繁殖力明显低于二倍体。三倍体太平洋牡蛎雌体的繁殖力仅为二倍体的2%。三倍 体牡蛎的雌雄性比与二倍体相近，但雌雄同体者明显增多。
(2)生长快。三倍体牡蛎的生长明显快于相应的二倍体。僧帽牡蛎(C. cucullata)、 大连湾牡蛎(C. talienwanesis)三倍体在幼虫时期就表现出生长优势。养殖两年半的悉 尼牡蛎(Saccostrea commercialis)三倍体比二倍体增重41%，1龄的三倍体太平洋牡蛎比 二倍体增重20%以上，3龄的美洲牡蛎三倍体增重41%。在繁殖季节里由于精、卵的排 放，二倍体牡蛎体重明显下降，壳的生长停止，而三倍体则保持继续生长。
关于三倍体的快速生长现象有三种假说解释：①杂合度增高假说。认为MI三倍体 的个体增大现象是其杂合度增高的结果。②能量转化假说。认为三倍体生长快于二倍体 是三倍体的不育性，从而将配子发育所需的能量转化为生长所致。③三倍体细胞的巨态 性假说。由于贝类的发育属于“嵌合型”，缺乏细胞数目补偿效应，细胞体积增大而细胞数 目并不减少，结果导致三倍体个体的增大。
(3)肉质鲜。牡蛎肉质的鲜美程度与其体内糖原含量密切相关。糖原含量高，则肉质 味道鲜美。在繁殖季节里，二倍体牡蛎性腺的发育消耗大量的糖原物质，体内糖原含量明 显降低，平均下降72%，其风味品质受到较大影响;而三倍体牡蛎由于性腺发育差，糖原 含量在繁殖季节里仅下降8%，体内一直保持较高水平的糖原含量，可让人们一年四季均 能吃到美味可口的牡蛎，特别在旅游季节，三倍体牡蛎深受国内外宾客的青睐。
三、四倍体牡蛎的培育
四倍体的培育的最终目的是与二倍体杂交生产100%的三倍体。目前，四倍体的产 生主要有两种途径：
(1)利用二倍体直接诱导四倍体。抑制第一极体或同时抑制两个极体的释放、抑制第 一次卵裂、细胞融合和人工雌核发育等方法都能获得四倍体胚胎或幼虫，但存活率低，难 以培育至固着变态。
(2)利用三倍体牡蛎诱导四倍体。即利用三倍体牡蛎产生的卵子与正常精子受精，然 后抑制第一极体，可产生存活的四倍体。其操作方法基本同三倍体。通过这种方法，已在 太平洋牡蛎和美洲牡蛎中成功的诱导出存活的四倍体牡蛎。
四倍体的诱导和培育是最终获得100%三倍体的根本出路，因为四倍体和二倍体杂 交可以产生100%的三倍体。这种方法安全、可靠、稳定、可操作性强，这已在太平洋牡蛎 中得到了证实，四倍体育种具有广阔的发展前景。
四、单体多倍体牡蛎的培育
单体多倍体牡蛎即单个的、不固着的多倍体牡蛎，它集单体牡蛎与多倍体牡蛎的优点 于一体。其培育方法：首先通过理化方法处理受精卵抑制极体释放或通过生物杂交途径 获得多倍体牡蛎的幼虫，然后，在幼虫即将附着变态时，采用肾上腺素处理诱导不固着变 态，或者采用颗粒固着基采苗并培育，也可利用先固着后脱基的方法，获得单体的多倍体 牡蛎。
五、牡蛎的雌核发育育种
1.精子的遗传失活
目前多采用紫外线杀菌灯照射进行精子的遗传失活处理。精子遗传失活的最佳照射 剂量在不同种类之间存在差异，并随照射精液的体积、密度以及紫外线强度的变化而变 化。在太平洋牡蛎，Guo等(1993)和Li等(2000)分别用3.24×10-3 J/mm2和4.32× 10-4 J/mm2的紫外线照射剂量遗传失活精子，成功诱导出雌核发育单倍体。在诱导过程 中，随着照射时间的增加，受精率出现下降，受精卵在到达D形幼虫期之前便停止发育。 扫描电镜观察结果显示UV照射破坏了牡蛎精子的顶体和鞭毛结构，随照射强度的增 加，顶体和鞭毛的破坏程度增大。
2.雌核发育二倍体的诱导
雌核发育单倍体通常呈现为形态畸形，没有生存能力，需要在减数分裂或卵裂过程中 进行二倍体化处理。通过抑制第一极体、第二极体或第一卵裂三种方法获得具有生存力 的雌核发育二倍体。利用CB(0.5 μg/mL，20 min; CB)、咖啡因(10 mmol/L)+高温 (32℃，10 min; CH)处理抑制第二极体释放的方法，均可以诱导出太平洋牡蛎雌核发育 二倍体(G2N)。其中以CB处理20 min诱导效果较好，诱导出雌核发育二倍体率高达 74.6%。但与正常二倍体和三倍体牡蛎相比，雌核发育二倍体牡蛎的生存率显著降低。