一、单细胞藻类的培养
1.作为饵料单胞藻的基本条件
饵料是贝类幼虫生长发育的物质基础。贝类幼虫很小，它只能摄食单细胞藻类(图 4-4)。单细胞藻类需具备下列基本条件：
(1)个体小，一般要求直径为10 μm以下，长20 μm以下。
(2)营养价值高、易消化、无毒性。
(3)繁殖快，易大量培养。
(4)浮游于水中，易被摄食。
(5)饵料要新鲜、无污染。
1.等鞭藻 2.湛江等鞭藻 3.三角褐指藻 4.牟氏角毛藻 5.小新月菱形藻 6.异胶藻
7.亚心形扁藻(亚心形卡德藻) 8.盐藻 9.青岛大扁藻(青岛卡德藻) 10.塔胞藻
图4-4 贝类育苗常用的饵料生物
2.常用单胞藻饵料种类及其形态
(1)金藻类：
1)等鞭藻3011，等鞭藻8701(Isochrysis galbana Parke)：等鞭藻为裸露的运动细胞， 呈椭圆形，幼细胞略扁平，有背腹之分，侧面观为长椭圆形。活动细胞长5～6 μm，宽2～ 4 μm，厚2.5～3 μm。具2条等长的鞭毛，长度为体长的1～2倍。色素体2个，侧生，大 而伸长，形状和位置常随身体的变化而变化。细胞具有1个小而暗红的眼点。储藏物是 油滴和白糖素，随着细胞的老化，白糖素的体积逐渐增大，直到充满细胞的后部。
2)湛江等鞭藻(Isochrysis zhanjiangensis. Hu. var.sp.)：湛江等鞭藻的运动细胞多 为卵形或球形，大小为(6～7) μm×(5～6) μm。细胞具几层体鳞片，在细胞前端表面有 一些小鳞片。具有2条等长的鞭毛，从细胞前端伸出。两条鞭毛中间有一呈退化状的附 鞭。色素体两片，侧生，金黄色，细胞核位于细胞后端两片色素体之间。一个或几个白糖 素颗粒位于细胞中部或前端。
3)绿色巴夫藻(Pavlova viridis)：细胞为运动型单胞体，无细胞壁，正面观呈圆形，侧 面观为椭圆形或倒卵形，细胞大小为6 μm×4.8 μm×4μm。光学显微镜下能见到一条 长的鞭毛，长度为细胞体长1.5～2倍。色素体一个，裂成两大叶围绕着细胞。有2个发 亮的光合作用产物——副淀粉位于细胞的基部。
(2)硅藻类：
1)三角褐指藻(Phaeodactylum tricornutum Bohlin)：三角褐指藻有卵形、梭形、三出 放射形三种形态的细胞。细胞的这三种形态在不同培养环境下可以互相转变。在正常的 液体培养条件下，常见的是梭形细胞和三出放射形细胞，这两种形态的细胞都无硅质细胞 壁。三出放射形态的细胞有3个“臂”，臂长皆为6～8 μm，细胞中心部分有1细胞核和1 ～3片黄褐色的色素体。梭形细胞长约20 μm，有2个略钝而弯曲的臂。卵形细胞较少 见，在平板培养基上培养可出现卵形细胞。
2)小新月菱形藻(Nitzschia closterium f.minutissima Ehrenb)：小新月菱形藻俗称 “小硅藻”，是单细胞浮游硅藻，具硅质细胞壁，细胞壁壳面中央膨大，呈纺锤形，两端渐尖， 皆朝同方向弯曲，似月牙形。体长12～23 μm，宽2～3 μm，细胞中央具1细胞核。色素 体2片，位于细胞中央细胞核两侧。
3)牟氏角毛藻(Chaetoceros muelleri Lemmerman)：细胞小型，多数呈单细胞，有时2 ～3个组成群体。壳面椭圆形到圆形，中央部略凸出。壳环面呈长方形至四角形。细胞 大小为(4～4.9) μm×(5.48～8.4) μm(环面观)。角刺细长，圆弧形，末端稍细，约20 μm。色素体1个，呈片状，黄褐色。
4)纤细角毛藻(Chaetoceros gracilisschutt)：细胞小型，多呈单细胞，有时2～3个细 胞组成链状，大小(5～7)μm×4 μm，角刺长30～37 μm。
(3)绿藻类：
1)青岛大扁藻(Platymonas halgolandica var. tsingtaoensis (Tseng et Chang))：又 名青岛卡德藻(Tetraselmis halgolandica var. tsingtaoensis(Tseng et Chang))，体长在 16～30 μm之间，一般是20～24 μm，宽12～15 μm，厚7～10 μm。卵圆形，前端较宽，中 间有一浅的凹陷，鞭毛4条由凹处伸出。细胞内有一大型、杯状、绿色的色素体。藻体后 端有一蛋白核，具红色眼点，有时出现多眼点特性。
2)亚心形扁藻(Platymonas subcordiformis(Wille))：又名亚心形卡德藻(Tetraselmis subcordiformis Wille)，藻体一般扁压，细胞前面观呈广卵形，前端较宽，中间有一浅 的凹陷，鞭毛4条由凹处伸出。细胞内有1大型、杯状、绿色的色素体。藻体后端有一蛋 白核，蛋白核附近具1红色眼点。体长11～14 μm，宽7～9 μm，厚3.5～5 μm。
3)塔胞藻(Pyramidomonas sp.)：多数梨形、侧卵形，少数半球形。细胞长12～16 μm，宽8～12 μm，前端具一圆锥形凹陷，由凹陷中央向前伸出4条鞭毛，色素体杯状，少 数网状，具1个蛋白核。眼点位于细胞的一侧或无眼点，细胞单核，位于细胞的中央偏前 端。不具细胞壁。
4)盐藻(Dunaliella spp.)：单细胞，无细胞壁，体形变化大，有梨形、椭球形、长颈形甚 至基部是尖的。大小也有差别，一般大的长22 μm，宽14 μm，小的长为9 μm，宽为3 μm。 鞭毛2条，位于藻体前端。体内有一杯状的叶绿体。在叶绿体内靠近基部有一个较大蛋 白核。眼点大，位于体的上部。细胞核位于中央原生质中。
(4)黄藻类：异胶藻(Heterogloea sp.)：异胶藻细胞多为长球形或椭球形。内有1块 侧生的黄绿色色素体，几乎占细胞的大部分。无蛋白核。细胞长4～5.5μm，宽2.5～4 μm。
3.单胞藻饵料的培养
(1)各种微藻的生态条件：见表4-3。
表4-3 常用微藻的生态条件
| 种类 | 盐度 | 温度(℃) | 光照(lx) | pH值 | ||||
| 范围 | 最适 | 范围 | 最适 | 范围 | 最适 | 范围 | 最适 | |
| 等鞭藻3011 | 10～30 | 10～35 | 20～25 | 1 000～10 000 | 6 000～9 000 | 8 | ||
| 等鞭藻8701 | 10～35 | 15～30 | 0～27 | 13～18 | 3 000～30 000 | 6～10 | ||
| 湛江等鞭藻 | 23～36 | 9～35 | 25～32 | 1 000～31 000 | 5 000～10 000 | 6～9 | 7.5～8.5 | |
| 绿色巴夫藻 | 5～80 | 10～40 | 10～35 | 15～30 | 4 000～10 000 | |||
| 三角褐指藻 | 9～92 | 25～32 | 5～25 | 10～20 | 1 000～8 000 | 3 000～5 000 | 7～10 | 7.5～8.5 |
| 小新月菱形藻 | 18～61.5 | 25～32 | 5～28 | 15～20 | 3 000～8 000 | 7～10 | 7.5～8.5 | |
| 牟氏角毛藻 | 10～25 | 5～30 | 25～30 | 5 000～25 000 | 10 000～15 000 | 6.4～9.5 | 8.0～8.9 | |
| 青岛大扁藻 | 30～35 | 12～32 | 25 | 1 000～10 000 | 2 500～5 000 | 8～10 | 8.9 | |
| 亚心形扁藻 | 8～80 | 30～40 | 7～30 | 20～28 | 1 000～20 000 | 5 000～10 000 | 6～9 | 7.5～8.5 |
| 塔胞藻 | 31～32 | 25 | 6 000～7 000 | 8.2 | ||||
| 盐藻 | 30～80 | 60～70 | 20～30 | 25～30 | 2 000～6 000 | 7～8 | ||
| 异胶藻 | 12～37 | 19～34 | 10～35 | 15～33 | 1 000～8 000 | |||
(2)微藻的培养液：依微藻种类不同，培养液的配制方法也不同，即使同一种类，个人 的惯用方法也不同。现将硅藻、金藻、绿藻和黄藻常用的培养液配方介绍如下，见表4-4， 4-5，4-6，4-7。
表4-4 金藻类培养液
| 培养液名称 | 培养液配方 | 用途 | |
| E-S培养液 | 硝酸钠(NaNO3)
磷酸二氢钾(KH2PO4) 土壤抽取液 海水 |
120 mg
1 mg 50 mL 1 000 mL |
培养等鞭藻3011用 |
| 湛水107-1号培养液 | 硝酸钠(NaNO3)
磷酸二氢钾(KH2PO4) 硫酸铁[Fe2(SO4)3](1%溶液) 柠檬酸钠(2Na3C6H5O7) 人尿 海水 |
50 mg
5 mg 5滴 10 mg 1.5 mL 1 000 mL |
培养湛江等鞭藻用 |
| 等鞭藻8701培养液 | 硝酸钠(NaNO3)
尿素(NH2CONH2) 磷酸二氢钾(KH2PO4) 柠檬酸铁(FeC6H5O7) 维生素B1 维生素B12 海水 |
30 mg
15 mg 6 mg 0.5 mg 0.1 mg 0.000 5 mg 1 000 mL |
培养等鞭藻8071用 |
| f/2改良培养液Ⅱ | 硝酸钠(NaNO3)
磷酸二氢钠(NaH2PO4) 海泥抽取液 人尿 海水 |
75 mg
4.5 mg 20～40 mL 1.5 mL 1 000 mL |
适用于金藻类的生
产性培养 |
| 生产上用金藻培养液 | 硝酸钠(NaNO3)
磷酸二氢钾(KH2PO4) 柠檬酸铁(FeC6H5O7) 维生素B1 维生素B12 消毒海水 |
60 g
4 g 0.5 mg 100 mg 0.5 mg 1 m3 |
生产上培养金藻用
培养液，适合于一 切金藻类 |
表4-5 硅藻类培养液
| 培养液名称 | 培养液配方 | 用途 | |
| 三角褐指藻、新月
菱形藻培养液Ⅰ |
人尿
海泥抽取液 海水 |
5 mL
20～50 mL 1 000 mL |
适用于培养三角褐
指藻、新月菱形藻 |
| 三角褐指藻、新月
菱形藻培养液Ⅱ |
人尿
硝酸钠(NaNO3) 磷酸二氢钾(KH2PO4) 硫酸铁[Fe2(SO4)3](1%溶液) 柠檬酸钠(2Na3C6H5O7) 硅酸钠(Na2SiO3) 维生素B1 维生素B12 海水 |
1.5～2 mL
50 mg 5 mg 5滴 10 mg 10 mg 0.1 mg 0.000 5 mg 1 000 mL |
适于培养三角褐指
藻、新月菱形藻 |
| 三角褐指藻、新月
菱形藻培养液Ⅲ |
硫酸铵[(NH4)2SO4]或硝酸铵
(NH4NO3) |
30 mg | 适于培养三角褐指
藻、新月菱形藻 |
| 过磷酸钙发酵尿液
柠檬酸铁(FeC6H5O7) 海水 |
3 mL
0.5 mg 1 000 mL |
||
| 三角褐指藻、新月
菱形藻培养液Ⅳ |
硝酸铵(NH4NO3)
磷酸二氢钾(KH2PO4) 柠檬酸铁铵[Fe(NH4)3(C6H5O7)2] 硅酸钾(K2SiO3) 海水 |
30～50 mg
3～5 mg 0.5～1.0 mg 20 mg 1 000 mL |
适于培养三角褐指
藻、新月菱形藻 |
| 黄海水产研究所角
毛藻培养液 |
硝酸铵(NH4NO3)
磷酸二氢钾(KH2PO4) 柠檬酸铁(FeC6H5O7) 海水 加入少量人尿，效果更好 |
5～20 mg
0.5～1.0 mg 0.5～2.0 mg 1 000 mL |
适于培养角毛藻 |
| 厄尔德-施赖伯培
养液 |
硝酸钠(NaNO3)
磷酸氢二钠(Na2HPO4) 海水 |
100 mg
20 mg 1 000 mL |
最简单的配方，适
于硅藻的培养 |
| 生产上用硅藻培养
液 |
硝酸钠(NaNO3)
磷酸二氢钾(KH2PO4) 硅酸钠(Na2SiO3) 柠檬酸铁(FeC6H5O7) 消毒海水 |
60 g
4 g 4.5 g 0.5 g 1 m3 |
适合生产上培养三
角褐指藻、新月菱 形藻和角毛藻 |
表4-6 绿藻类培养液
| 培养液名称 | 培养液配方 | 用途 | |
| 绿藻培养液Ⅰ | 硝酸铵(NH4NO3)
磷酸二氢钾(KH2PO4) |
50～100 mg
5 mg |
培养扁藻、小球藻
或杜氏藻时，添加 10～20 mL海泥抽 取液效果更好 |
| 柠檬酸铁(FeC6H5O7)或柠檬酸铁铵
[Fe(NH4)3(C6H5O7)2] |
0.1～0.5 mg | ||
| 海水 | 1 000 mL | ||
| 绿藻培养液Ⅱ | 人尿
海泥抽取液 海水 |
3～5 mL
20～30 mL 1 000 mL |
适用于扁藻和其他
绿藻的生产性培 养，效果良好 |
| 盐藻培养液 | 甲液： | 此培养液适宜于培
养盐藻。 使用时将甲、乙两 液混合，如果再加 2%～3%的人尿效 果更好 |
|
| 氯化钠(NaCl)
柠檬酸铁(FeC6H5O7) 海泥抽取液 海水 乙液： |
5～10 g
0.001 g 20～30 mL 500 mL |
||
| 硝酸钠(NaNO3)
磷酸二氢钾(KH2PO4) 海水 |
0.5 g
0.05 g 500 mL |
||
| 生产上用绿藻培养液 | 硝酸钠(NaNO3)
尿素(NH2CONH2) 磷酸二氢钾(KH2PO4) 柠檬酸铁(FeC6H5O7) |
60 g
18 g 4 g 0.5 g |
适用于扁藻的生产
性培养 |
表4-7 黄藻类培养液
| 培养液名称 | 培养液配方 | 用途 | |
| 培养液Ⅰ | 硫酸铵[(NH4)2SO4]
磷酸二氢钾(KH2PO4) 柠檬酸铁(FeC6H5O7) 海水 |
10～20 mg
1～2 mg 0.1～0.2 mg 1 000 mL |
适合异胶藻的保种
培养和小型培养 |
| 培养液Ⅱ | 人尿
海水 |
3～5 mL
1 000 mL |
适合异胶藻生产性
培养 |
(3)容器和工具的消毒：
1)加热消毒：利用直接烧灼、煮沸和烘箱干燥等高温，杀死微生物和其他敌害。此法 只适用于较小容器的消毒。
2)漂白粉消毒：工业用的漂白粉一般含有效氯25%～35%。消毒时按(1～3)×10-4 的比例配成水溶液，把容器、工具在溶液中浸泡0.5 h，便可达到消毒目的。也可使用漂 白精消毒，漂白精一般含有效氯约70%。
3)酒精消毒：用纱布蘸70%酒精涂抹容器和工具表面便可达消毒目的。
4)高锰酸钾消毒：以5×10-4的比例配成溶液把要消毒的容器、工具浸泡5 min，便可 达消毒目的。
5)石灰酸消毒：将容器、工具置于3%～5%石炭酸溶液浸泡0.5 h，便可消毒。
(4)海水消毒：
1)加热消毒：加热到70℃，持续20 min～1 h;加热到80℃，持续15 min～0.5 h;加热 到90℃，持续5～10 min均可达消毒目的。
2)过滤除害：利用砂滤、陶瓷过滤器过滤海水。后者比前者效果好，多用于饵料二级 培养和中继培养。砂滤较粗糙，可用于扩大培养上。
3)酸处理消毒：按每升海水加1个当量浓度的盐酸溶液3 mL的比例，使海水pH值 下降到3左右，处理12 h便可消毒，然后加入同样量的氢氧化钠，使海水pH恢复到原来 水平便可。
4)漂白粉消毒：使用(15～20)×10-6有效氯的漂白粉或漂白精处理海水，一般下午处 理，次日上午取其溶液便可接种培养。也可用1 000×10-6有效氯的漂白粉处理海水，再 用100×10-6硫代硫酸钠处理，使有效氯消失，经沉淀，取其上层清液，再施肥、接种。
(5)接种：
1)接种的选择和要求：选择生命力强、生长旺盛的藻种;颜色正常的绿藻呈鲜绿色，硅 藻呈黄褐色，金藻呈金褐色;有浮游能力种类上浮活泼，无浮游能力的种类均匀悬浮水中; 无大量沉淀，无明显附壁，无敌害生物污染;藻种浓度较高，要高比例接种。
2)接种比例：藻种浓度不同，接种比例是不同的(表4-8)。
表4-8 藻种接种比例
| 藻种名称 | 浓度(×104/mL) | 藻种与培养液比例 | 备注 |
| 亚心形卡特藻 | 30～40 | 1∶(3～5)
1∶(1～2) |
温度高季节 |
| 三角褐指藻 | 300 | 1∶(4～9)
1∶(2～3) |
室内
室外 |
| 湛江叉鞭金藻 | 250 | 1∶(3～6) | |
| 异胶藻 | 200 | 1∶5
1∶2 |
室内
室外 |
一般单细胞藻类可按1：(2～5)的比例接种。接种最好是上午8：00～10：00。
(6)培养方法：单细胞藻类的培养方法多种多样。按照采收方式分为一次培养、连续 培养和半连续培养;按照培养规模和目的分为小型培养、中继培养和大量培养;按照与外 界接触程度分开放式培养和封闭式培养。单细胞藻类能有效地利用光能、CO2和无机盐 类合成蛋白质、脂肪、油、碳水化合物以及多种高附加值活性物质，故目前多利用封闭式光 生物反应器(Photobioreactor)来进行微藻的大量和高密度培养。
(7)培养管理：
1)充气与搅动：通过鼓风机、空气压缩机向饵料容器中充气。无充气条件的，需每日 搅拌3～5次，每次1～5 min。
2)调节光照：光照要适宜，尽力避免强的太阳直射光。为防直射光照射，饵料室可用 毛玻璃、竹帘、布帘等遮光调节。在阴天或无阳光情况下，需利用日光灯或碘钨灯等的光 照代替。
3)调节温度：要保持单胞藻生长所需的最适温度范围。温度太高，要注意通风降温。 严冬季节，要水暖、气暖，提高温度。
4)调节pH值：二氧化碳的吸收和某些营养盐的利用，可引起pH上升或下降，在培养 过程中，如果pH值过高，可用1 mol/L的HCl调节，pH值过低，用1 mol/L的NaOH调节。
5)观察生长：可以通过观察藻液的颜色、细胞运动情况、有否沉淀和附壁现象、有无菌 膜及敌害生物污染来判断，每日上、下午各作一次全面检查。根据具体情况采取相应措 施，加强管理。
(8)单细胞藻类密度统计方法：单细胞藻类一般用1 mL水体含单胞藻个体数表示其 密度，常用血球计数板统计。血球计数板中央有两块具有准确面积的大小方格。其中每 块可分为9个大方格。每一大方格面积是1 mm2。每一大格又分为16个中格。在中央 的大格中的每一中格又分为25个小格，共400个小格(也有的中央是25个中格，每个中 格分16个小格，总数也是400格)。当加玻片时，每一大格即形成一个体积为0.1 mm3 的空间。计数时，可取4个角上的大格，每大格取4个中格，共16个中格全部计数，再乘 上10 000，即得1 mL单胞藻个体数。
也可使用水滴法计数。1 mL水体中含单胞藻数=计数每滴平均值定量吸管每毫升 的滴数稀释倍数。在生产中还采用透明度、光电比色、重量法测定密度。
(9)藻膏的研制：目前的贝类人工育苗中，常常因为投入过多的藻液，使育苗池的水污 染，影响育苗水质，特别是投入被污染和老化的饵料更为严重。为了防止过多藻液入池， 应通过连续离心方法去掉多余污水，将藻液浓缩，把单胞藻制成藻膏再投喂。这样可以保 证饵料质量，避免代谢产物和氨氮入育苗池。此外，单胞藻制成藻膏，加防腐剂、装罐，可 保藏0.5～1年，随用随取，质量高，使用方便。藻膏的研制可以提高饵料池的利用率，能 利用育苗空间、时间进行常年生产，从而保证为贝类人工育苗特别是亲贝蓄养提供源源不 断的单胞藻饵料。
4.饵料培养注意事项
(1)消毒：容器和工具要严格消毒，采用加热、化学药品如漂白粉、酒精、高锰酸钾等处 理，杀死微生物和其他敌害。培养饵料用的海水也要经过加热、过滤及酸或漂白粉等消毒 处理。
(2)接种：要选择生命力强、无污染、生长旺盛的新鲜藻种，一般可按1：(2～5)的比 例接种。
(3)充气与搅动：通过鼓风机、空气压缩机向饵料容器中充气。无充气条件的，需每日 搅拌3～5次，每次1～5 min。
(4)调节光照：光照要适宜，尽量避免强的太阳直射光。为防直射光照射，饵料室可用 毛玻璃、竹帘、布帘等遮光调节。在阴天或无太阳光的情况下，需利用日光灯或碘钨灯等 的光照代替。
(5)调节温度：要保持单胞藻生长所需的最适温度范围。温度太高，要注意通风降温。 严冬季节，要水暖、气暖，以提高温度。
(6)调节pH值：二氧化碳的吸收和某些营养盐的利用，可引起pH值上升或下降，在培养 过程中，如果pH值过高，可用1 mol/L的HCl调节;pH值过低，用1 mol/L的NaOH调节。
(7)观察生长：可以通过观察藻液的颜色、细胞运动情况、有否沉淀和附壁现象、有无 菌膜及敌害生物污染来判断。每日上、下午各作一次全面检查，根据具体情况采取相应措 施，加强管理。
二、光合细菌的培养
当前光合细菌(Photosynthetic Bacteria)不仅是水质良好净化剂，而且是贝类幼虫的 饵料。
光合细菌营养价值高，粗蛋白含量达65.45%，粗脂肪7.18%，含有丰富的叶酸、多种 维生素、泛醌、类胡萝卜素和氨基酸等。在牡蛎等贝类幼虫培育中，光合细菌均可作为辅 助饵料投喂。
光合细菌属于细螺菌目，分为红螺菌科、着色菌科、绿杆菌科和绿色丝状菌科等4科， 共23属80余种。目前广泛应用在水产养殖上的主要种类是红螺菌科的紫色非硫细菌 (Phodospirillaceae)。其共同的特征是：具鞭毛，能运动，不产生气泡，细胞内不积累硫磺。
1.培养方式
大量培养光合细菌，通常采用两种培养方式，即全封闭式厌气光照培养方式和开放式 微气光照培养方式。
(1)全封闭式厌气光照培养：全封闭式厌气光照培养是采用无色透明的玻璃容器或塑 料薄膜袋，经消毒后，装入消毒好的培养液，接入20%～50%的菌种母液，使整个容器均 被液体充满，加盖(或扎紧袋口)，造成厌气的培养环境，置于有阳光的地方或用人工光源 进行培养。定时搅动，在适宜的温度下，一般经过5～10 d的培养，即可达到指数生长期 高峰，此时，可采收或进一步扩大培养。
(2)开放式微气光照培养：开放式微气光照培养，一般采用100～200 L容量的塑料桶 或500 L容量的卤虫孵化桶为培养容器，以底部成锥形并有排放开关的卤虫孵化桶比较 理想。在桶底部装1个充气石，培养时微充气，使桶内的光合细菌呈上下缓慢翻动。在桶 的正上方距桶面30 cm左右装1个有罩的白炽灯泡，使液面照度达2 000 lx左右。培养 前先把容器消毒，加入消毒好的培养液，接入20%～50%的菌种母液，照明，微充气培养。 在适宜的温度下，一般经7～10 d的培养，即可达到指数生长期高峰，此时，进行采收或进 一步扩大培养。
2.培养方法
光合细菌的培养，按次序分为容器、工具的消毒，培养基的制备，接种，培养管理四个 步骤。
(1)容器、工具的消毒：容器、工具洗刷干净后，耐高温的容器、工具可用直接灼烧、煮 沸、烘箱干燥等三种方法消毒。大型容器、工具及培养池一般用化学药品消毒。常用的消 毒药品有漂白粉(或漂白液)、酒精、高锰酸钾等。消毒时，漂白粉浓度为(1～3)×10-4，酒 精浓度为70%，石炭酸浓度为3%～5%，盐酸浓度为10%。
(2)培养基的制备：
1)灭菌和消毒：菌种培养用的培养基应连同培养容器用高压蒸汽灭菌锅灭菌。小型 生产性培养可把配好的培养液用普通铝锅或大型三角烧瓶煮沸消毒;大型生产性培养则 把经沉淀砂滤后的水用漂白粉(或漂白液)消毒后使用。
2)培养基配制：根据所培养种类的营养需要选择合适的培养基配方。按培养基配方 把所需物质称量，逐一溶解，混合，配成培养基。也可先配成母液，使用时按比例加入一定 的量即可。
配方1：磷酸氢二钾(K2HPO4)0.5 g，磷酸二氢钾(KH2PO4)0. 5 g;硫酸铵 [(NH4)2SO4]1 g，乙酸钠(CH3COONa)2 g，硫酸镁(MgSO4)0.5 g，酵母浸出汁(或酵母 膏)2 g，消毒海水1 000 mL。
配方2：利用贝类加工的肉汤，加入底泥悬浮液，经发酵、煮沸，冷却过滤后作为营养 液进行培养。本配方简单，适合大规模生产性培养。
3)接种：培养基配好后，应立即进行接种。光合细菌生产性培养的接种量比较高，一 般为20%～50%，即菌种母液量和新配培养液量之比为1：(1～4)，不应低于20%，尤其 微气培养接种量应高些，否则，光合细菌在培养液中很难占绝对优势，影响培养的最终产 量和质量。
4)培养管理：
①搅拌和充气：光合细菌培养过程中必须充气和搅拌，作用是帮助沉淀的光合细菌上 浮获得光照，保持菌细胞的良好生长。
②调节光照度：培养光合细菌需要连续进行照明。在日常管理工作中，应根据需要经 常调整光照度。白天可利用太阳光培养，晚上则需要人工光源照明，或完全利用人工光源 培养。人工光源一般使用碘钨灯或白炽灯泡。不同的培养方式所要求的光照强度有所不 同。一般培养光照强度控制在2 000～5 000 lx。如果光合细菌生长繁殖快，细胞密度高， 则光照强度应提高到5 000～10 000 lx。调节光照强度可通过调整培养容器与光源的距 离或使用可控电源箱调节。
③调节温度：光合细菌对温度的适应范围很广，一般温度在23℃～39℃，均能正常生 长繁殖，可不必调整温度，在常温下培养。如果要加快繁殖，应将温度控制在光合细菌生 长繁殖最适宜的范围内，使光合细菌更好地生长。
④调节pH：随着光合细菌的大量繁殖，菌液的pH值上升，当pH值上升超出最适范 围，一般采用加酸的办法来降低菌液的pH，醋酸、乳酸和盐酸都可使用，最常用的是醋 酸。
⑤生长情况的观察和检查：可以通过观察菌液的颜色及其变化来了解光合细菌生长 繁殖的大体情况。菌液的颜色是否正常，接种后颜色是否浅变深，均反映光合细菌是否正 常生长繁殖以及繁殖速度的快慢。必要时可通过显微镜检查了解情况。
⑥问题的分析和处理：通过日常管理、检查，了解光合细菌的生长情况，找出影响光合 细菌生长繁殖的原因，采取相应的措施。影响光合细菌生长的原因很多，内因是菌种是否 优良，外因是光照、温度、营养、敌害、厌气程度等。温度、光照和pH同时影响着光合细菌 的生长，而且温度、光照和pH之间是互相制约的，温度与光照的强弱是对立统一的，所以 光合细菌生长的最适条件应是互应的，即温度高，光照应弱;温度低，光照应强。如果是温 度高、光照强，pH就会迅速升高，培养基产生沉淀，抑制光合细菌的生长;如果温度低、光 照弱，光合细菌得不到最佳能源，生长速度也慢。经试验得出光合细菌生长的最适条件 是：温度15℃～20℃时，光照30 000～50 000 lx，培养基pH为7;温度25℃～30℃时，光 照为3 000～5 000 lx，培养基的pH为7。