食品百科

14.1.3 菠萝蛋白酶的提取及其应用

2023-02-14

菠萝原料生产糖水菠萝罐头后,约有60%的下脚料,其中外皮和果实两端约占48%, 果心和果目约占12%。这些下脚料在罐头生产的最初年代,是不利用的,而是作为废料 运出工厂弃去。这样,一个日加工200t菠萝原料的小型工厂,每天就有120t菠萝废料需 要运出工厂倒掉,既浪费资源,又严重污染环境。

根据化学分析,菠萝的外皮中含糖分8%~10%、粗蛋白0.56%~0.71%、粗纤维 1.03%~1.10%、有机酸0.60%~0.77%、维生素C 20.16mg/100g和维生素A等成分。 菠萝外皮榨出的果汁中,含有0.1%~0.2%的蛋白酶。因此,菠萝加工的下脚料是综合 利用的宝贵原料。目前,已从菠萝加工的下脚料中,开发制取了鲜菠萝汁罐头、优质菠萝 糖浆、加糖菠萝汁罐头、药用菠萝蛋白酶、柠檬酸和菠萝酒等多种产品,对推动我国菠萝罐 头工业的发展,具有重大的意义。

菠萝蛋白酶是菠萝下脚料综合利用的重要产品之一,为一种新型的生物化学制品。 这里就菠萝蛋白酶的提取方法和用途等内容详细叙述如下。

14.1.3.1 高岭土吸附法从菠萝皮中提取菠萝蛋白酶

(1) 菠萝皮榨汁 用于提取菠萝蛋白酶的菠萝外皮和果实两端,必须新鲜、无腐烂和 发酵变质。菠萝果实去除外皮前,最好将其充分清洗干净,果皮削下后应保持清洁卫生, 避免榨汁前洗涤果皮。因为菠萝果皮若经洗涤后,不仅其可溶性固形物降低2%~3%, 而且菠萝蛋白酶也受到一定的影响。

榨汁的方法有用连续榨汁机或榨汁桶压榨两种。连续榨汁机分为破碎和压汁两部 分。菠萝皮由喂料输送带,均匀地喂入锤式破碎机。破碎机安装于螺旋榨汁机的进料斗 上部,经破碎的果皮卸落到榨汁机压出果汁,皮渣则由机尾出渣口连续排出。其生产能力 为4~5t/h,出汁率约为50%。这种榨汁机压出的果汁中,混入的果皮碎屑较多,需经振 荡式的粗滤筛滤除皮渣。

简单的榨汁方法,是采用螺旋压榨桶压榨。菠萝皮先经齿式或锤式破碎机破碎,然后 装入压榨桶。每桶装料约150kg,为了使果汁易于渗出和卸渣方便,装料前先在桶底垫一 层粗麻布,然后向桶内装料约30kg包好,再垫一层麻布,再装料约30kg包好,直至装满, 加盖压榨。这种压榨桶的螺旋杆,有用动力传动加压,也有用人力操作加压。如采用人力 操作加压,一般菠萝皮的出汁率约为56%。

(2) 加高岭土吸附 上述榨出的菠萝汁,应迅速过滤除去皮屑等杂质。气温高或原 料成熟度高时,需按汁量加入0.03%~0.05%的山梨酸钾或0.02%的亚硫酸,以防止菠 萝皮汁变质。然后,再按汁量加入5%的高岭土(要求洁白干燥,细度在200目以上),搅 拌约20min,静置澄清30~60min。澄清的速度取决于菠萝的成熟度和皮汁的新鲜度。成 熟度高或新鲜度差的皮汁,澄清速度较慢,因而澄清的时间应根据具体情况而定。例如, 有的加工厂静置澄清6~8h后,才进行分离洗脱(添加防腐剂量需相应增加),但静置澄清 的时间越长,对蛋白酶活力的损失越大,最好采用自动排渣的离心机沉降分离,以缩短澄 清时间,保持酶的活力。当吸附着蛋白酶的高岭土沉降后,以虹吸法吸出上层清液(约为 菠萝皮汁重的80%),供生产菠萝糖浆等综合利用。沉淀出来的泥浆,转移到洗脱工序。

(3) 洗脱 上述泥浆用浓度为16%的氢氧化钠溶液或浓度为25%的碳酸钠溶液,调 整pH至6.5~7.0。然后,按泥浆量加入7%~9%的工业用食盐,搅拌约30min,使蛋白 酶从高岭土中洗脱出来,迅速以离心机或压滤机分离,滤除高岭土。过滤得到的酶液应为 澄清透明液。为了提高过滤的效率,可在洗脱桶内添加适量经水洗的蔗渣作为助滤剂。

(4) 盐析 上述洗脱并经过滤的清液,应边过滤边分批在小桶内进行盐析,严防积 压。其法将澄清的滤液,先以1:3的工业盐酸调整pH至4.8~5.1,再按洗脱液重加入 20%粉碎、无杂质的硫酸铵(啤酒用的菠萝蛋白酶,则需先加入0.05%预溶的醋酸锌),搅 拌至硫酸铵完全溶解,静置8h以上,酶即被盐析出来,虹吸除去上层硫酸铵清液(供农业 用)。沉淀物(酶糊)再以离心机分离除去残液。

(5)压榨 将上述酶糊装入布袋中进行压榨,以除去残余的硫酸铵废液。加压必须 缓慢,先轻后重,并勤加翻动,要求在8~10h内压榨完毕。

(6) 冷冻 压榨后的酶糊,均匀地摊放于铝盘内,厚度6~8mm,送入-12℃以下的 冷冻库中进行冻结。

(7) 干燥 干燥工艺对酶的活力影响较大,一般要求温度低、时间短的干燥条件,最 好采用冷冻升华干燥,也可在室温下采用真空干燥。其法在干燥箱内先放入4竹筛无水 氯化钙(方形竹筛铺以塑料薄膜后,铺放一层无水氯化钙),再将酶糊2.0~2.5kg均匀地 摊放于另外4个铺以白细布的竹筛内,然后进箱与氯化钙筛交替放置,在室温和真空度 90kPa的条件下,干燥4~5h。干燥过程中,应加强管理。通常,进箱干燥1.0~1.5h后, 取出竹筛,将酶搓碎、翻动,进箱换位,干燥1h后再翻动换位,如此操作至干即可。

(8) 粉碎过筛 干燥的酶,应即进行球磨粉碎。每个球磨桶每次投料15kg,加入直 径约4cm的瓷球8~10kg,球磨时间不超过2h。球磨好的酶粉,用20目的尼龙筛过筛, 将粗粒再粉碎过筛。

(9) 吸湿 筛分过的酶,每次投料15kg放入球磨桶内(不加瓷球),回转1h后出料分 装于四个铺以白细布的竹筛上,按干燥操作进行真空吸湿4~6h。

(10)包装 供啤酒专用酶,要求酶活力每克为40万福林单位*,可用不同活力的酶 粉进行调整,使产品的酶活力调整至40万福林单位。若生产的酶粉活力均超过40万福 林单位,则可添加无水碳酸钠,使产品标准化。医药工业用的菠萝蛋白酶,各批酶粉仅需 拌匀后标明酶活力即可。酶粉经测定活力后,分装于塑料袋,外用铁桶(罐)包装出售。

采用高岭土法生产的菠萝蛋白酶,产品质量较纯,活力也较高,提酶后的汁液可综合 利用。但是,分离操作较困难,生产流程较长,设备条件要求也较高,且耗用的硫酸铵较 多,酶活力的总回收率较低。

14.1.3.2 单宁沉淀法从菠萝皮中提取菠萝蛋白酶

蛋白质遇单宁即产生沉淀,这是众所周知的。菠萝酶也是一种蛋白质,采用单宁沉淀法从菠萝皮中提取菠萝蛋白酶就是应用这个原理。该法操作较简单,易于土法上马,生产 工艺控制得好,产品的酶活力和酶活力的总回收率也均较高。

(1)澄清 菠萝皮汁先经滤清,或自然澄清2h(有的加工厂澄清4~6h),但需及时按 汁量加入0.05%的山梨酸钾,以防止菠萝皮汁在澄清过程中变质。防腐剂的添加量根据 气温、菠萝皮汁的新鲜度和卫生条件而定,在保证菠萝皮汁在提酶过程中不变质的前提 下,应尽量少加或不加防腐剂,使提酶后的汁液易于综合利用。经澄清的菠萝皮汁,用虹 吸法吸取其清液进行提酶处理。

(2)加单宁沉淀 澄清的菠萝皮汁,按其量计徐徐加入0.08%~0.1%的单宁(以煮 沸冷却的水溶解,经过滤后加入),搅拌5~10min,静置沉淀3h,使汁液分层澄清。有些加 工厂采取先澄清30~60min后,虹吸出上层清汁,在此清汁中再加入0.02%的单宁,以沉 淀汁液中残留的菠萝酶。这样,第一次沉淀出来的菠萝酶,其沉淀时间不超过60min,对 提高酶活力和酶活力的总回收率均有较好的效果。

单宁加入菠萝皮汁经搅拌后,其菠萝酶即逐渐与单宁凝结而沉淀,虹吸除去上层的清 液,将下层酶液及时边搅拌边徐徐加入1:3的盐酸,调整pH为3.0~3.1,转移至分离 工序。

(3) 分离 上述调好pH的酶液,经离心分离除去残汁,取出酶膏立即用塑料袋包 装、称重,送入冷冻库冻结。

(4)冷冻 包装好的酶膏及时送入冷冻库在-12℃以下进行冷冻,使酶膏冻结成 硬块。

(5)解冻 取出酶膏硬块后,在室温、鼓风的的条件下,使其解冻至松散状态。然后, 移入离心机中离心分离解冻液,调整适宜的转速,使离心分离的湿酶保持疏松状态。

干燥、粉碎和吸湿等操作,均与高岭土吸附法相同。

(6) 注意事项 菠萝蛋白酶是一种水解蛋白质的催化剂,对人体皮肤有刺激分解作 用,生产人员必须穿戴工作服、工作帽和橡胶手套等防护用品。

14.1.3.3 菠萝蛋白酶的应用

菠萝蛋白酶能作用的基质,包括所有常用的蛋白质,如明胶、酪蛋白、谷蛋白、球蛋白 和肌纤蛋白等。它的水解蛋白质的活力,比木瓜酶高10倍以上,故其用途十分广泛。工 业上用于皮革脱毛、蚕茧脱胶、肉类软化、明胶制造和啤酒澄清等。特别是在医疗上,用于 治疗水肿和多种炎症,效果较好。

*福林单位是指在pH 7.0、40℃下,酶水解酪蛋白1min析出1μg酪氨酸即为1个酶活力单位。