当用氢氧化钠或氢氧化钾对油脂进行皂化时，其中所有不被 皂化的物质称为不皂化物，如烃类、固醇类、色素、维生素、甘 油醚等。对鱼油来说，不皂化物是一项重要指标，因为一般的鱼 油，特别是某些鲨鱼肝油含有大量的烃类(如角鲨烯)，因而其不 皂化物含量较高。
(一) 试剂
(1) 2mol/LKOH乙醇溶液 称取115g氢氧化钾，加入95% 乙醇溶解后，用95%乙醇稀释至1 000ml，静置24h，倾出上清液， 贮存于装有苏打石灰球管的玻璃瓶中。此溶液应在三个月之内保 持无色。
(2) 石油醚 沸点30～60℃，杂质不超过0.002%。
(3) 95%与50%的乙醇。
(二) 操作步骤
称取混合均匀的油样5g(称准至0.001g)，置于250ml锥形 瓶中 (用2mol/L KOH乙醇溶液50ml，分多次少量洗入)，连接 回流冷凝管，置沸水浴上煮沸1h，然后加水50ml，如果混浊，则 继续煮沸至透明后取下，冷却。然后将溶液移入分液漏斗中，再 以50ml石油醚分数次洗涤原样瓶，并将石油醚洗液全部倾入分 液漏斗中，猛烈摇1min，静置分层使其澄清(如醚层中有乳状物， 加入5ml 95%乙醇或3滴氢氧化钾液以破坏之)。将皂液分出于 另一分液漏斗中，加入50ml石油醚振摇，待澄清后，再以50ml石 油醚按上法进行第三次萃取。将3次石油醚提出物合并于分液漏 斗中，先以微碱性50%酒精洗涤，再以无碱性50%乙醇反复洗涤， 每次30ml，以除去石油醚中残留的肥皂，直至洗液(以水60ml洗 涤) 加酚酞指示剂不呈红色为止。将洗净的石油醚提取物置于已 知质量的抽取瓶中，回收石油醚，将抽取瓶置100～105℃下烘1h， 置于干燥器内冷却称重。以后每干燥30min称重1次，直至连续 二次称重之差不超过0.002g时为止。
(三) 计算
平行试验结果允许差不超过0.2%。