水产百科

二、人工催产

2023-02-09

草、青、鲢、鳙、鲮鱼在池塘中性腺可以发育成熟,但是,目前尚不能在池塘中自然产卵,必须进行人工催产。人工催情技术的好坏,直接影响人工繁殖的效果。

催产池及其用具 催产池是给亲鱼产卵提供一定生态条件的场所,应设在距离亲鱼池和孵化场地较近、有良好水源且排注水方便的地方。形状面积和结构各地不一,但必须坚固、牢实,内壁光滑,水流顺畅,无漩涡死角,池底平坦且有一定的倾斜度,集卵快速方便,亲鱼在其中产卵活动自如。目前生产上用得比较多的有圆形、椭圆形两种,均用砖、石、水泥砌成。

圆形池 一般为直径约10m、水深1.5~1.8m的圆形水泥池。池底四周向中心倾斜,比降2%~3%; 池底中心设一出水 (卵) 口,用暗管与集卵池相通,暗管用直径约25cm的陶瓷管连接而成。池壁与地平面垂直,在池壁的上半段接近水面处设一直径10~15cm的进水口,与池壁切线成40°。集卵池设于池壁外侧 (图1-2-1)。

椭圆形池 长12~15m,宽7~8m,水深约1.5m的瓜子形水泥池。进、出水口要在同一中心轴线上,两腰弧度长度相等,池底平滑,由进水口向出水口倾斜,比降2%。进出水口用闸门控制,出水口外接集卵池。池壁与地平面垂直或略有坡度均可(图1-2-2)。

催产用具 常用的有亲鱼夹、亲鱼袋、挖卵器、注射器、温度计、量杯、研钵、毛巾、脸盆等,根据实际需要置备 (图1-2-3)。

二、人工催产

A-A切面图

图1-2-1 圆形产卵池

1.阀门 2.集卵池 3.冲水管 4.冲水口 5.控制水位出水口 6.集卵绠网和尾箱

(引自 《家鱼人工繁殖技术》)

二、人工催产

图1—2—2 椭圆形产卵池

(引自 《家鱼人工繁殖技术》

二、人工催产

b 图1-2-3 催产用具

a.亲鱼夹 b.亲鱼袋

催产剂的种类和制备

种类 有明显效果的催产剂主要是鲤、鲫鱼和同种成熟鱼的垂体、人绒毛膜促性腺激素和促黄体素释放激素及其类似物。LRH-A活性高、效果好,目前使用最广。

制备

LRH-A用改进的固相法人工合成,成品白色粉末状,分装于安培瓶或青霉素瓶中,避光干燥或低温保存,不易失活。但LRH-A溶于水后,结构不稳定,应现用现配。配制时,先将预定体积的注射用水 (生理盐水或蒸馏水) 吸入注射器,打开安培瓶或将针头插入青霉素瓶的橡皮塞,注入少量水,溶解后再吸回注射器备用。

HCG (human chorionic gonadotrophin) 是从怀孕2~4个月的孕妇尿中分离提取的。成品白色或淡黄色粉末状,分装于安培瓶或青霉素瓶中。HCG是一种糖蛋白,易吸潮变性,也需在阴凉,干燥低温处保存。HCG溶水后很不稳定,必须现用现配。悬液配制方法和LRH-A相同。

脑垂体 (hypophysis)

摘取 被摘取脑垂体的鱼,最好是鲤、鲫等性成熟个体。摘取的时间最好在产卵季节前夕,此时垂体中GTH含量较高。

垂体在间脑腹面,与下丘脑相连。摘取时,先用刀沿鱼的两眼上缘将头盖骨切开,用镊子夹住棉花,将脑腔中的脂肪拨去,吸掉血液,即可看到整个鱼脑,再用镊子将连在脑后的脊髓轻轻挑起,翻开脑,可见一心脏形的白色小颗粒,即是脑垂体。垂体留在骨窝中,为避免破损,需用镊子拨去周围的薄膜,再用镊子在垂体两侧向下轻压,即可将垂体托起后取出。

保存 垂体可以新鲜使用,效果很好,但需蓄养大量材料鱼,很不方便,因此,一般都用丙酮 (或纯酒精) 脱水脱脂后保存备用。将取出的垂体放入大于其体积30倍的丙酮中浸泡6h后,倒去旧液,换入新液,再浸泡8~10h,取出垂体,阴干后放入小瓶,蜡封瓶口。或第二次浸泡时,连丙酮一起封在瓶中保存。干法若保存得好,可数年不失效。

悬液配制 先将经过计量的垂体放入研钵,充分研碎成粉末,然后将预定体积的注射用水,放少许进研钵,和匀后吸入注射器,再将其余部分水放入并洗净研钵,一并吸入注射器备用。垂体悬液也需现用现配。

成熟季节和催产期

成熟季节 我国幅员辽阔,亲鱼的性成熟季节有早有迟。长江中下游一般为5月上旬至6月中旬,华南地区约早1个月. 华北地区约迟1个月,东北地区则更迟些。各地应根据实际情况确定催产日期。一般来说,当地的小麦黄、水温基本稳定在20℃左右时便是催产的适宜季节。

催产期 催产期是指亲鱼性腺发育到Ⅳ期中、末阶段后能维持的时间。对某一尾鱼来说,在正常气候条件下,鲢、鳙约30d左右,草、青鱼约25d左右; 对一群鱼来说,约40d左右。如果超过这段时间,性腺趋向退化,产卵效果下降,甚至难产、不产。

催产期也因气候变化而略有长短。气候变化平缓,夏季气温上升慢,催产期可能略长; 气候变化激烈,夏季气温上升快,催产期可能短些。

在相同气候和饲养条件下,鲢、草鱼成熟较早,鳙、青鱼成熟稍晚,催产时,可按鲢、草、鳙、青的顺序进行,最后催产鲮鱼。草鱼的适当成熟期较短,应抓住最佳时机,抓紧催产。有经验的场,每年催产早、晚期小搞,中期大搞,是很有科学道理的。家鱼可以催产的水温一般18~31℃,最适水温22~28℃。

催产亲鱼的配组

成熟度 (maturity) 的选择判别 在江河中捕捞的亲鱼成熟度差别很大,即使池塘中培育的亲鱼成熟度也不一致,催产时必须经过挑选判别。判别方法有:

外形观察 鲢、鳙雌鱼腹部膨大,生殖孔红润,后腹饱满、柔软而有弹性,仰翻腹部隐约可见肋骨,抬高尾部,还可见到卵巢轮廓向前移动; 雄鱼能挤出精液,即视为成熟度好。若雌鱼腹部过大,弹性消失,或前腹大,后腹扁平较硬,都不宜选用,可放入清水或微流水中暂养数日再选用。草鱼选前停食两天,以免饱食后难以判断。雌鱼腹部膨大而松软,仰腹向上可见腹部中间呈凹瘪状、两侧卵巢块下垂的轮廓; 雄鱼能挤出精液,即视为成熟度良好。青鱼个体大,腹肌较厚,性腺发育好的雌鱼,外观也不像草、鲢、鳙那样典型,因此,只要腹部膨大或较膨大即可选用; 雄鱼精液均较少,常常在人工授精 (artificial fertilization) 时,挤出或吸出精液,供授精使用。雌鲮腹部也较膨大而柔软,尤以下腹软、泄殖孔微红凸出为最佳; 雄鱼能挤出精液为好。

挖卵观察 挖卵器用不锈钢、塑料等材料制成,长20cm,直径0.3~0.4cm,表面光滑,顶端钝圆,头部有一长约2cm的槽,槽的两壁锉成刀刃状,以便切割卵巢取卵 (图1—2—4)。挖卵时先将头 部慢慢插入生殖孔 (reproductive opening),然后向右或左稍偏,再轻轻用力伸入一侧卵巢约4~5cm,旋转几下抽出,即可得少量卵粒,用肉眼或药物处理观察。

二、人工催产

图1—2—4 挖卵器

肉眼观察 将挖出的卵粒放在玻璃片上观察。若卵粒大小整齐,大卵占绝大部分,有光泽,较饱满,大部或全部核偏位,则成熟度好; 若卵粒大小不齐,相互结块,不易脱落,表明成熟度差; 若卵粒过于扁塌成糊状,无光泽,表明亲鱼已趋向退化。

药物处理观察 将挖出的卵粒放在玻璃器皿或小瓷盘内,倒入少许透明固定液,2~3min后,即因卵质和卵黄的透明度较卵核大,核呈半透明状态时间迟,而可以明显地看到核象。根据核象,可以基本判定催产效果。核偏位,催产效果较好,过分成熟或退化无核象,催产效果极差。常用的固定液有: 95%酒精5份,加冰醋酸1份混合 (应快速观察) 和95%酒精4份,加冰醋酸1份,松节油透醇4份混合。

雌、雄配比 若催情后采用自然产卵受精,雄鱼要稍多于雌鱼,雌雄比可用1:1.5。如雄鱼不多,可用3雌配4雄或4雌配5雄,即n: (n+1) 的配比,最低不能低于1:1。若催情 (estrulization) 后采用人工授精 (artificial insemination),雄鱼可以少于雌鱼,1尾雄鱼的精液可供2~3尾同样大小的雌鱼受精之用。

配组时,应注意同一批催产的雌、雄鱼的个体大小一致,以便发情追逐产卵动作的协调,避免雌雄个体相差太大,产卵追逐时不能配合。尽量避免近亲交配。

剂量和注射

剂量 恰当掌握催产剂的用量是保证亲鱼顺利产卵的重要因素。剂量要依催产剂和亲鱼的种类以及催产季节、水温、亲鱼成熟度的不同,灵活掌握。催产早期或晚期、水温低、亲鱼成熟度差、个体小的情况下,剂量可以稍微偏高; 反之,则应低些。前述三种主要催情剂对不同鱼类催产效果不同。可以单用,也可混合使用,现将常用的方法、剂量介绍如下:

单用LRH-A 每千克体重草鱼用5~15μg; 鲢、鳙鱼用10~20μg; 鲮鱼30~50μg。单用垂体: 每千克体重草、鲢、鳙鱼一般都用3~5mg; 青、鲮鱼用4~6mg。(体重0.5kg鲤鱼垂体重约1mg,1~2kg鲤鱼垂体重约3mg; 0.15kg鲫鱼垂体重约0.4mg。) 单用HCG: 一般只用于鲢、鳙鱼。每千克体重鲢鳙用3~5mg(2mg效价),或800~1 200IU,或按说明书使用。

混用 青鱼可以单用垂体,但多数都采取垂体与LRH-A混合使用。每千克体重青鱼用LRH-A15~~30μg加垂体2~3mg。鲢、鳙鱼可以单用HCG或垂体,也可用LRH-A与垂体或HCG混合,每千克体重鲢、鳙用LRH-A10μg加垂体或HCG1mg左右。草鱼最好用LRH-A或垂体,但在LRH-A或垂体缺乏时,可以用垂体或LRH-A与HCG混合。每千克体重草鱼用垂体2mg或LRH-A5μg加HCG3mg。

上述剂量均指雌鱼。雄鱼剂量均为同种雌鱼的一半。

注射方法 常用的有体腔注射 (Coelomic injection) 与肌肉注射 (intramuscular injection)。体腔注射时,将鱼体侧卧水中,上半部托出水面,在胸鳍基部无鳞处的凹入部位,将针头朝鱼头前上方与鱼体轴成45°~60°角刺入体内1.5~2.0cm,徐徐注入药液。肌肉注射是在侧线与背鳍间的背部或背鳍后端无鳞处,把针头朝鱼头方向,稍微挑起鳞片,插入2cm左右,徐徐注入药液。

注射液的体积一般控制在每尾亲鱼2~3ml为宜,鱼体小时还可以少些。注射液不宜太浓或太稀。太浓,注射时稍有外溢即影响剂量; 太稀,水分多对鱼体无益,又难注射。

注射次数 有一次注射和两次注射。一次注射是把催产剂的全量一次注入鱼体; 两次注射是把催产剂分两次注入鱼体。一般说,一次注射有省时、省力、少伤鱼的优点,但催产效果往往不如两次; 两次注射虽较麻烦,但由于第一针具有在短期内促进卵细胞进一步成熟的同步作用,催产效果往往高于一次。

两次注射时,第一针的用药量必须严格控制在全剂量的1/10左右,不宜过高。尤其在催产盛期,亲鱼成熟度好、水温高时,第一针用药量过高,极易导致亲鱼早产,达不到两次注射的预期效果。使用混合催产剂两次注射时,一般第一针都纯用LRH-A,第二针注入其余药量; 若仅是垂体和HCG混合,第一针全用垂体。

两针间距,有长有短。长的达24h甚至48h,短的7~8h。在催产早期,水温低、亲鱼成熟度差时,针距宜长,反之宜短。多数针距在12h左右,催产效果和工作安排也较适宜。亲鱼成熟度差或催产难度较大的(如青鱼),可以在催产前15~20d,将每尾亲鱼注射LRH-A2~5μg催熟,效果颇佳。

效应时间 效应时间是指亲鱼最后一次注射到开始发情产卵的时间。效应时间的长短与水温、注射次数及催产剂、亲鱼的种类有关。水温低,效应时间长; 水温高,效应时间短。一次注射效应时间长,两次注射效应时间短。用LRH-A催产效应时间略长,用垂体、HCG催情效应时间略短。青鱼的效应时间略长,鲮鱼的效应时间略短 (表1-2-3、表1-2-4)。

表1-2-3 两次注射的水温与效应时间关系

水 温 (℃) 从第二次注射到亲鱼 发情的时间(h) 从第二次注射到产卵、 人工授精的时间(h)
20~21 22~23 24~25 26~27 28~29 10~11 9~10 7~8 6~7 5~6 11~12 10~11 8~10 7~8 6~7

注: 根据长江水产研究所的资料,鲤垂体两次注射草、鲢、鳙。

表1-2-4 一次注射的水温与效应时间关系

水 温 (℃) 注射到受精的时间 (h) 人工授精有效时间 (h)
20~21 22~23 24~25 26~27 28~29 16~18 14~16 12~14 10~12 10左右 18~20 16~18 14~16 12~14 10~12

注: 根据湖南水产研究所用鲤垂体一次注射草鱼、鲢、鳙的试验结果。

中国科学院实验生物研究所,用HCG一次注射鲢鱼,得水温与鲢鱼产卵的时间关系 (图1-2-5)。

产卵受精

自然产卵(spontaneous spawning) 亲鱼注射催情剂后,让其在产卵池中自行产卵、排精完成受精作用,称为自然产卵。

成熟亲鱼在催情剂的作用下,经过一定时间出现雌、雄鱼相互追逐的兴奋现象,即发情(estru)。起初,在水下追逐,水面只见漩涡和波纹; 随后,逐渐激烈,鱼体不时露出水面,回旋追逐,形成波浪。高潮时,雄鱼头顶雌鱼腹部,雌鱼侧卧水面,腹、尾部激烈颤抖收缩,将卵产出,同时雄鱼紧贴雌鱼腹部排精;或雌雄鱼扭在一起,摆动身体,颤抖胸、腹鳍,同时产卵、排精。亲鱼产卵开始后,往往每隔数分钟或十数分钟再产卵一次,连续数次,约经2h左右,完成产卵的全过程。

亲鱼产卵过程中,要专人管理,观察发情产卵动态。发情前1~2h,开始冲水,刺激发情; 产卵时,保持环境安静; 掌握水流速度不宜太大,便于精、卵充分接触,以提高受精率,及时收卵。

二、人工催产

图1—2—5 温度与鲢产卵的关系

(引自 《家鱼人工生殖的研究》)

人工授精 (artificial insemination) 当亲鱼发情达到高潮即将产卵时,立即拉网捕起亲鱼 (brood fish),人工采卵、采精,使精、卵结合,完成受精作用,称人工授精。人工授精方式有干、湿法两种。

干法授精 用大孔亲鱼夹或大毛巾裹住雌鱼上腹部,斜置鱼体,生殖孔对准容器 (一般用大脸盆),擦干鱼体、容器,轻压鱼腹部,卵即流入容器,同时用同法将雄鱼精液挤入容器,用羽毛将精、卵充分搅匀,静置1min后,加入少量清水,稍加搅拌,再静置1~2min,用清水清洗数次,过数,放入孵化器孵化。

湿法授精 与干法 (dry method) 的不同之处是先在容器中盛一些水,然后挤入精子,再挤入卵,或将精、卵同时挤入,让精、卵在水中结合受精。由于湿法授精操作较方便,受精率也不低,目前生产上已多行湿法 (wet method)。

人工授精的受精率 (fertilization rate) 高低主要取决于卵的成熟度。要采得适当成熟的卵,必须准确地掌握好采卵时间。有时,常常会遇到个别亲鱼因个体差异超过效应时间而挤不出卵粒,可以将其暂养在亲鱼袋或亲鱼夹中,过0.5h或1h再行采卵。

自然产卵与人工授精的结合 自然产卵有很多优点,但有时个别亲鱼因某种原因不能自产; 人工授精,设备简单,但难于准确地掌握采卵时间,且较伤鱼。因此,实际生产中常采用自然产卵与人工授精结合。即先让亲鱼在产卵池 (spawning pond) 自产,待产卵高潮过后,拉网捕鱼,对个别未产、半产亲鱼行人工授精,这样能收到较好的催产效果。

鱼卵计量 鱼卵计数方法有两种。

重量法 (weight method) 未吸水的草、鲢鱼卵,每克重约750粒,鳙鱼卵约650粒。人工授精所得鱼卵可称重过数。

体积法 (volumetric method) 未吸水的草、鲢鱼卵,每毫升650~700粒,鳙鱼卵约500粒。人工授精的卵可用量杯过数。自产吸水后的卵,因吸水时间的长短,体积大小不一,一般都用碗量过数。

产后亲鱼护理 亲鱼经拉网、搬运、催情、产卵后,体质虚弱,普遍受伤,极易感染发病死亡,需加防护。轻伤的可用药物外涂伤口,常用的外涂药有孔雀石绿溶液、龙胆紫、5%食盐水、呋南西林软膏、金霉素和青霉素软膏等。重伤的,除外涂药物外,还需注射消炎或抗生素药物。体重5~8kg亲鱼注射10%磺胺噻唑1ml,或兽用青霉素5万~10万IU。体重10kg以下的注5万IU,10kg以上的注10万IU。