1.产卵
通过1年以上室内驯化养殖的亲鱼，采取人工调控环境条 件，进行营养强化培育，生殖腺能正常发育。在人工控制调节的 条件下，经过45天以上的培育，性腺即可达到发育成熟，进行自 然产卵受精。现在亲鱼培育技术比较成熟，通过调节亲鱼培育 的环境条件，采用合理的环境刺激，促使牙鲆亲鱼自然排放精 卵，可以满足苗种繁育所需的优质受精卵。
牙鲆为多次产卵种类，其产卵量与鱼的大小以及性腺发育 程度有关，每尾亲鱼每次产卵数万至二三十万粒。牙鲆自然产 卵顺畅，一般不需通过特别调节进行催产。经验丰富的养殖人 员通过观察即可确定性成熟产卵时间，当雌鱼生殖腺已明显膨 大，用手触摸腹部有柔软感，且生殖孔红肿，但未产卵，可以挤出 部分卵但质量较差，而雄性挤出乳白色精液镜检发现精子活泼。 这时可以采取人工调节环境变化，进行环境条件刺激催产，促进 亲鱼自然排放卵子和精子，常用的方法有水流刺激和温差刺激 的方式。流水刺激是在每次排水时，当水位排到最低点后，通过 强水流加水排水的方法，通过流水刺激鱼体，促进其性腺成熟排 放精卵。温差刺激是通过短时间的升温或降温，改变亲鱼培养 温度，然后再回到培养温度，刺激亲鱼排放精卵，达到催产的目 的。
牙鲆产卵一般在夜间，开始产卵的第5～7天是排卵量和受 精率最高的阶段。3龄以及以上的亲鱼排卵量可达200万枚。 牙鲆性腺为分批成熟，多次产卵。在产卵初期所产的卵，受精率 及孵化率都较低，一般不予采用。产卵盛期再开始集卵、孵化。
牙鲆的卵为浮性卵，一般采用溢水孔或虹吸表层水的办法 收集浮性受精卵，也可结合用筛绢网捞取。当亲鱼在培育池中 自然产卵时，在产卵池溢水口处安放用80目筛绢做的网箱接 卵。网箱放在桶里，多余的水从桶上面溢出，卵则留在网箱内。 因产卵池水中杂质较多，为保持孵化时的水质清洁，最好用手抄 网将较粗杂质捞走。然后停止流水，静置一段时间，待死卵、坏 卵下沉后，再将浮在上面的卵捞起，用清洁的海水冲洗后放到孵 化器中孵化。
2.受精卵的计数
(1)容量计数法：将收集到的受精卵放在一定容量的水槽中 定容，充气搅匀后，用100毫升的烧杯在不同处随机取样3次， 全量计数，然后推算出水槽中的卵数。
(2)重量计数法：用80目的筛绢捞取卵子，滤去水后称重， 每克受精卵为1 200～1 600枚，即按1 200～1 600粒/克或每千 克120万粒算出卵子的数量。
3.受精卵的运输
可采用聚乙烯塑料袋或帆布桶运输。
(1)聚乙烯塑料袋：装入容量50%～70%的洁净沙滤海水 (温度与产卵池水温相同)，放卵密度1万～2万/升，充氧后扎 好口，放入泡沫塑料箱中。气温高时塑料袋周围放置冰块或其 他降温材料，以防止运输途中温度升高。封箱后用飞机或汽车 运输。
(2)帆布桶或水槽：装入约2/3的水，将装在聚乙烯塑料袋 中的受精卵充氧后扎好口，放在装好水的帆布桶或水槽中，用卡 车运输，运输途中避光并防止运输途中水温升高。
以上两种方法对当天产的卵子，运输15～20小时可保持较 高的孵化率;对于产出后1～2天的卵子，运输过程的死亡率较 高，孵化后的畸形率也较高。经过运输的受精卵到达目的地后， 立即放入孵化器中静置20～30分钟，吸出下沉的卵，调整水温 后孵化。
4.受精卵孵化
收集上浮的受精卵，用洁净的海水冲洗，除去多余的精子， 然后用10×10-6～15×10-6的碘液药浴消毒3～5分钟，用洁 净的海水冲洗。将处理好的受精卵，放入80目的孵化网箱中孵 化，不间断微量充气(吸底时停气)，隔日吸底一次。每日更换部 分新水，换水量为总水体的20%～30%。光照控制在500～ 2 000勒克斯。孵化网箱多为0.2米3左右的四方柱形(0.5米 ×0.5米×1.0米)或圆柱形，一个孵化箱中可放入10万左右粒 受精卵进行孵化。在水温15℃条件下，牙鲆受精卵经过65小 时(2.5日)仔鱼便可破膜而出，完成孵化。初孵仔鱼全长2.21 毫米左右。
牙鲆的发育可分为胚胎发育和胚后发育两个阶段。胚胎发 育是指受精卵从卵裂到仔鱼即将破膜这一段时期，又称卵膜内 发育期。牙鲆胚胎发育时序如表31所示。
(1)孵化设备：牙鲆的孵化方法较简单，可用孵化网箱或孵 化水槽，也可直接在育苗池中孵化。采取一次换水的静水孵化 或流水孵化，微量充气。
表31 牙鲆受精卵胚胎发育时序(水温14.6～15.5℃)
| 发育期 | 受精后时间 | 发育期 | 受精后时间 |
| 2细胞期
4细胞期 8细胞期 16细胞期 32细胞期 128细胞期 高囊胚期 低囊胚期 原肠初期 胚盾形成期 胚盘下包1/2 |
1小时50分
2小时25分 3小时25分 4小时05分 4小时35分 6小时15分 10小时00分 11小时00分 14小时30分 15小时45分 18小时50分 |
胚盘下包2/3
视泡期 卵黄栓形成期 克氏囊形成期 胚体绕卵黄1/2 尾芽期 晶体初现 胚体绕卵黄3/5 胚体绕卵黄4/5 孵出期 |
21小时40分
22小时00分 27小时10分 33小时40分 34小时40分 43小时20分 44小时30分 50小时40分 57小时40分 63小时30分 |
孵化网箱一般为0.5～1米3，深0.6～1.5米，用80目筛绢 制成。孵化水槽多用玻璃钢水槽、强化玻璃钢水槽或聚碳酸酯 水槽，容积0.5～8米3，水深0.8～1米。
(2)孵化条件：
①孵化密度：孵化网箱一般为10万～50万粒/米3，孵化水 槽一般为1万～4万粒/米3。
②水温：牙鲆受精卵在水温10～24℃时均可孵化，但适温 为14～16℃，最适水温为15℃左右。水温对牙鲆受精卵的发育 有很大影响，发育孵化速度在适温范围内，随着水温的升高而加 快。通常当水温在22℃以上时，孵化仔鱼的畸形率会急剧升 高。水温在20℃或20℃以上，孵化时间为40小时左右;水温在 15℃左右，孵化时间为50～60小时;水温在10℃时，孵化时间 为150小时以上;如果水温低于10℃，则受精卵很难发育、孵 化。
③盐度：牙鲆受精卵在适宜的水温条件下对盐度的适应性 较强，盐度在25‰～45‰时均可孵化。这一盐度范围内，海水 盐度较高时，受精卵的孵化率相应提高，畸形率降低。用17‰ 以下或用50‰以上的海水孵化，24小时后全部死亡，孵化的最 适盐度是28‰～32‰。
④pH值：pH值在8.0左右牙鲆卵的孵化率较高，碱性较 强的环境会导致孵化仔鱼的畸形率升高，仔鱼的耐酸能力也较 弱，pH值7.5～8.5为宜。
⑤氨氮：水体中的氨氮通常以NH3和NH4+两种形式存 在，NH3对牙鲆有很大的毒性，而NH4+无毒。当NH3浓度超 过0.05×10-6时，牙鲆卵的死亡率急剧升高，畸形率也升高。
⑥溶解氧：要求达到6毫克/升以上，一般微流水或微充气 均可满足。
⑦其他：牙鲆对PO42-和NO3–的耐受性较高，PO42-浓度在 50×10-6以内，NO3–浓度在100×10-6以内，受精卵都可以孵 化。水体中的S2-、Hg2+对牙鲆卵有极毒作用，浓度达0.05× 10-6～0.1×10-6时，即可对受精卵产生毒性，畸形率可达90% 以上。水中酚含量超过10×10-6，阴离子表面活性剂含量大于 0.5×10-6时，牙鲆受精卵在一日内全部死亡。非离子表面活性 剂的毒性较小，但致畸率却相当强。当水中含量达到0.01× 10-6以上时，孵化仔鱼100%畸形，各种重金属对牙鲆卵也有相 当的毒性。依据不同金属对牙鲆胚胎的滞育、致畸、成活率及孵 化率的影响，得出5种金属对牙鲆胚胎的毒性大小顺序为Cu> Zn>Cd>Pb>Cr。
(3)日常管理：孵化期间每天记录水温变化，保持水温稳定。 经常在显微镜下观察胚胎发育情况，并做好记录。孵化过程中， 死亡的卵发白下沉。因此，每天应将沉到底部的死卵吸出，并添 加适量的新水，以防水质变坏。孵化过程中最好能微量充气，但 充气量不能过大，在吸污时要停止充气，以便脏物、死卵下沉。 进水冲击不能过大，防止卵膜破裂。静水孵化时只换水1次，要 用等温新水。如果所用海水的重金属含量较高，可加2～5毫 克/升的EDTA。
(4)孵化仔鱼的计数方法：用100～1 000毫升的烧杯随机 取样3次，计算其中仔鱼数，求出平均值，推算出孵化仔鱼数，求 出孵化率。计算公式为：
孵化率=(孵出仔鱼数/受精卵数)×100%