微生物百科

芽孢染色法

最近更新:2023-03-31

endospore staining,spore staining芽孢的有无是细菌鉴定中的重要指标,与医疗、食品、发酵等实践也有密 切的关系。芽孢具有多层厚实而致密的壁,透性低,难以染色。芽孢染色法 是根据芽孢既难以染色且一旦染上色后又难以脱色的特性而设计的。具体 地说,所有芽孢染色法都基于同样原则:除了选用着色力强的染料外,还须较 长时间加热,促进染料透入芽孢,再用脱色剂处理,于是菌体脱了色,而芽孢 仍保持原色,最后用对比度强的染料对涂片进行复染,从而使菌体与芽孢呈 现出对比度明显的两种不同颜色。现介绍4种有代表性的方法。

1.周氏改良的Schaeffer氏法(1975年)。

染色操作:①制备菌液——加1~2滴蒸馏水于小试管(75 mm×10mm) 中,用接种环从斜面上挑取2~3环菌苔,制成浓稠菌液;②加染色液——加 5%孔雀绿水溶液2~3滴于小试管中与菌液混匀;③加热——将试管放入沸 水浴中15~20 min;④涂片——用接种环取数环菌液涂片;⑤微火固定细菌 涂膜;⑥用自来水脱色;⑦加番红(即沙黄)或石炭酸复红液复染2~3 min; ⑧用吸水纸吸干后镜检。结果:芽孢绿色,菌体为红色。本法把原在载玻片 上实施的染色、加热等操作改在小试管内进行,故具有加热条件稳定、操作方 便、节省染料和染色均匀等优点。

2.Conklin氏改良的Wirtz氏法(1934年)。

染色操作:①常规涂片后加热固定;②滴加5%孔雀绿水溶液,蒸气加热 10 min(干燥时应补加染料);③用流水洗30s;④用5%红汞水复染1 min; ⑤用流水洗;⑥用吸水纸吸干后镜检。结果:芽孢绿色,菌体红色。

3.Snyder氏改良的Dorner氏法(1934年)。

染色操作:①涂片并使干,其上盖1小片吸水纸;②滴满新过滤的Ziehl氏 石炭酸复红;③用蒸气加热5~10min,不时补充染料;④去掉滤纸,用95%乙醇脱 色;⑤用自来水洗;⑥加1滴苯胺黑饱和水溶液(或Dorner氏苯胺黑溶液),并使均 匀铺开;⑦文火加热使快干。结果:芽孢红色,营养细胞无色,背景呈灰色。

4.Dorner氏法(1926年)。

染色操作:①在小试管中加入2~3滴用蒸馏水制备的细菌浓稠悬浮液; ②加入等量新过滤的Ziehl氏石炭酸复红;③在沸水浴中煮10 min或更长时 间;④取1环置盖玻片或载玻片上,再加1环Domer氏苯胺黑溶液后混匀; ⑤涂成薄片并快速气干。结果:芽孢呈红色,营养细胞无色,背景为灰色。