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紫菜体细胞育苗

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根据细胞全能性的原理,运用现代生物技术将紫菜叶状体的体细胞经酶解,使之分离成单个细胞,并直接发育成幼苗,以此作为苗种的来源可起到与壳孢子采苗同样的效果。采用体细胞育苗,不仅可大大简化操作程序,减轻劳动强度,而且可提高单位水体紫菜育苗量和育苗效益。紫菜体细胞育苗技术主要包括:种藻选择和保藏,种藻的复苏,酶解与细胞收集,体细胞培养,采苗。

种藻选择和保藏 种藻选择主要注意选择的季节、藻体的大小、藻体的健康度。在江苏,条斑紫菜一般选择在2月中旬到4月上旬的藻体,坛紫菜则尽量选择10月上、中旬日龄为30~40天幼苗;条斑紫菜宜小,选择的藻体表面要有光泽、有韧性、无附着杂藻。

选好的种藻先用清洁海水洗去种藻表面附泥及杂藻,然后置通风处阴凉至半干,迅速用无毒塑料袋扎密封再冷藏于1~2℃的冰箱或冷库备用。

种藻复苏 将冷藏的种藻取出后立即浸泡于温度为10~20℃的自然海水中,经再次挑选后,放入比重为1.026的消毒海水(加N—NO-310ppm,P—PO-41ppm)中培养2~3天,培养条件为:光照1000~2000勒克斯,光周期12:12HD,温度18~20℃,冲气培养。

酶解与体细胞收集 酶解前,将种藻用消毒海水清洗数次,切成小块(1~2平方毫米),再用海水洗数次,然后吸干称量待用。目前我国使用的酶有海螺酶、鲍鱼酶、琼胶酶和纤维素酶。只用纤维素酶不能酶解出紫菜的单细胞来,而用数种酶按一定比例配好效果更佳。

酶液配制步骤为:酶溶剂的配制、酶粉的称取、pH值的调整。坛紫菜酶溶剂多用2摩尔(克分子)的葡萄糖溶液作酶溶剂,条斑紫菜用0.7~0.8摩尔的甘露醇另加0.1%氯化钙、0.1硫酸镁的无菌海水为酶溶剂较好。酶粉一般按每克种藻用10毫升酶液的比例来称取。酶液在酸性情况下酶解效果好,可用1盐酸或氢氧化钠调整酶液pH值在5.8~6.5。坛紫菜最适酶解温度为28~29℃,条斑紫菜最适温度为25~27℃。酶解pH值为6.0~6.5。酶解过程采用摇床摇动,效果很好。另外,种藻的不同种类与酶解时间也是影响酶解效果因素。把处理的种藻放在配制好的酶液中,调控所需温度,同时放在摇床上、黑暗条件下振荡(每分钟100转),酶解1小时后开始镜检有无离解细胞,以后每隔10~15分钟检查1次,直至认为已达一定量细胞为止。酶解结束后,先将酶细胞液用60微米筛绢过滤,将过滤液用手摇离心机或电动离心机离心,上面酶液可重新利用,离心沉淀的细胞用1.030比重的无毒海水悬浮细胞,再离心,如此重复3次,每次离心5分钟(1500rpm),充分洗去酶液。最后将获得细胞放入比重1.034MES培养液中培养。

体细胞培养 体细膜培养方式。体细胞培养方式分为平面培养(以静止为主)、悬浮培养(立体培养)、池培养(兼平面与立体两种方式)。其光照强度最高需3000勒克斯;水温控制在20℃,最高不超过23℃;定时添加培养液并定时更换新的培养用水;通气要合适。日常管理工作主要是光照、温度的控制、换水、培养用水、镜检细胞生存率等。

采苗 体细胞采苗方法有直接采苗法、条斑紫菜的孢子采苗、固定化法。

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