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人工诱导鲍三倍体

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生物学原理 皱纹盘鲍的卵子在第一次成熟分裂中期受精,受精后放出第一和第二极体,完成成熟分裂。如果通过人为的诱导处理,阻止其放出第一(或第二)极体,使本来要成为第一(或第二)极体的单倍染色体组保留下来,引起染色体的加倍,就能形成第一极体阻止型三倍体(3N-1Pb)或第二极体阻止型三倍体(3N—2pb),其原理如图1.16所示。皱纹盘鲍的受精卵在水温21℃条件下,受精后12~13分钟放出第一极体,32~33分钟放出第二极体。因此,只要在受精卵放出极体前进行诱导处理,就能形成三倍体。具体地说,受精后10分钟开始处理,可以形成第一极体阻止型三倍体;受精后30分钟开始处理,可以形成第二极体阻止型三倍体。

鲍的三倍体形成原理示意图鲍的三倍体形成原理示意图

 

 

 

 

 

 

 

A、正常二倍体的形成 B、3N-1Pb的形成 C、3N-2Pb的形成

(箭头表示诱导处理)

诱导方法 人工诱导鲍三倍体的方法可分为物理法与化学法两大类,前者有温度休克、压力处理等,后者采用细胞松弛素B(简称CB)等药物处理。低温休克法与CB处理法都是诱导鲍三倍体的有效方法。①低温休克法。将鲍的精子与卵在常温海水中受精后,按照设定的处理开始时间(即受精后10分钟或30分钟),将受精卵用250目筛绢制成的网箱承接,放入预先调配好的低温海水(水温3.0±0.5℃)中浸渍处理,处理持续时间为10分钟,达到持续时间后,立即将受精卵收容,直接移到常温海水中孵化培育。②CB诱导法。由于CB难溶于水,先把CB用少量二甲亚砜(简称DMSO)溶解,再加到海水中,CB浓度以每升1.0~1.5毫克为宜,并调整海水中DMSO的最终浓度为每升100微升。受精后10分钟或30分钟,将受精卵浸渍在上述CB海水溶液中,持续处理15分钟。处理之后为除去残留在卵子表面的CB,再用每升100微升的DMSO海水溶液浸洗卵子30分钟,然后将受精卵置于正常海水中孵化。

三倍体鲍的倍数性判别方法 采用染色体计数法。早期可用刚孵化的担轮幼虫,3厘米以上的鲍可用鳃组织作材料,制作染色体玻片标本。根据皱纹盘鲍二倍体的染色体数为2n=36,三倍体为3n=54,进行染色体观察计数,从而确定其倍数性。制作染色体玻片标本时,先将担轮幼虫或鳃组织经0.1%秋水仙素处理,再用0.075M的KCl溶液低渗作用30~60分钟,卡诺氏液(纯酒精:醋酸=3∶1)充分固定后得到的细胞悬浊液滴片,最后经20%的吉母萨液染色即可。观察时应选择20~30个染色体分散良好、清晰的分裂相进行计数,可在高倍显微镜下直接进行,也可利用带有投影绘图装置的显微镜、描图后计数,或利用显微摄影装置拍照后计数。

三倍体的诱导率 指三倍体分裂相的细胞数占分裂相细胞总数的百分率。由于卵子的成熟度、处理时的条件等因素,目前各种诱导鲍三倍体的方法还难以达到100%的诱导率。一般处理强度(水温、药物浓度等)加大、持续时间延长,三倍体诱导率提高,但胚胎的正常发育率和成活率则降低。用低温休克法诱导时,鲍的三倍体诱导率可达50~60%;用CB诱导,鲍三倍体诱导率可达60~80%。

三倍体鲍苗的培育 用预先附有底栖硅藻的透明波纹板作为采苗器,采苗密度每平方厘米0.1个幼体,稚鲍培育阶段每天换水1~2次,每次1/2,壳长3毫米以上时用1%酒精麻醉剥离。幼鲍采用网箱流水饲育法,投喂鲜嫩海藻或人工配合饵料,日流水量为饲育水体的10倍。

三倍体鲍的生长 对皱纹盘鲍三倍体的生长情况进行研究的结果表明,三倍体与二倍体的当年稚鲍及2龄前期,在壳长和体重的增长上无明显差异,但从2龄后期开始,三倍体的壳长、体重增长逐渐优于二倍体。在室内饲育19个月的鲍,三倍体平均壳长达40毫米,平均个体重达8.9克,分别比同期的二倍体壳长大10.2%,体重大20.1%。

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